Hibridación
in
situ Fluorescente
(FISH : Fluorescent In Situ
Hybridization)
página actualizada en junio de 2002
La FISH es una nueva tecnología que utiliza sondas de DNA marcadas
con fluorescencia para detectar o confirmar anomalías génicas
o cromosómicas que generalmente están más allá
del poder de resolución de la citogenética de rutina. Primero,
la muestra de DNA (cromosomas metafásicos o núcleos en interfase)
se desnaturaliza, proceso que separa las hebras complementarias
de la estructura en doble hélice del DNA. A la muestra desnaturalizada
se le añade entonces la sonda de interés, marcada con fluorescencia,
que se hibridará al DNA de la muestra en el sitio diana, en el proceso
denominado templado, donde se vuelve a formar una doble hélice.
La señal de la sonda se observa mediante un microscopio de fluorescencia
y la muestra de DNA se clasifica según la presencia o ausencia de
la señal.
FISH de Metafase
La FISH puede usarse sobre células en metafase para detectar microdeleciones
específicas más allá de la resolución de la
citogenética de rutina o para identificar material extra de origen
desconocido. Puede también ser de ayuda en casos donde es difícil
determinar mediante la citogenética de rutina si un cromosoma tiene
una deleción simple o está implicado en una reorganización
sutil o compleja. Además, la FISH de metafase puede detectar algunos
de los reordenamientos específicos que se observan en ciertos cánceres.
El número de síndromes de microdeleción diagnosticados
por FISH está aumentando con rapidez. La sensibilidad de estos ensayos
es en todos los casos mejor que la de la citogenética de rutina,
pero depende del síndrome en concreto. En algunos, la sonda es específica
para el gen defectuoso, como en el Síndrome de Williams, donde se
ha encontrado una deleción en el gen de la elastina en el 96% de
los pacientes con diagnóstico confirmado. En otros síndromes
como el de Prader-Willi/Angelman, la etiología es heterogénea
y las microdeleciones sólo forman una parte de los casos (60%).
Síndromes de Microdeleción Actualmente Diagnosticables
mediante FISH
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Síndrome del maullido (cri-du-chat)
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Síndrome de Miller-Dieker
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Síndrome de Smith-Magenis
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Síndrome de Wolf-Hirschhorn
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Deficiencia de esteroide-sulfatasa
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Síndrome de Prader-Willi/Angelman
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Síndrome DiGeorge/Velo-Cardio-Facial/CATCH 22/Shprintzen
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FISH de Interfase
La FISH se puede usar sobre células en interfase para determinar
el número de copias de uno o varios cromosomas, así como
para detectar algunas reorganizaciones específicas que son características
de ciertos cánceres. La ventaja principal de la FISH de interfase
es que se puede realizar muy rápidamente si es preciso, normalmente
en 24 horas, porque no requiere crecimiento de las células.
Un buen ejemplo es el ensayo de Prueba de Aneuploidía,
que se realiza sobre células del fluido amniótico cuando
hay una fuerte indicación clínica de una de las trisomías
más comunes. Se desnaturalizan los núcleos de la muestra,
se hibridan con sondas específicas para los cromosomas 13, 18, 21,
X e Y, y los resultados se obtienen comúnmente en 24 horas. La prueba
de aneuploidía suele incluir también una citogenética
de rutina para confirmar los resultados o detectar cualquier anomalía
no detectada por la FISH de interfase.
Pulse en los enlaces siguientes para ver algunos ejemplos de FISH
detectados en nuestro laboratorio: